流動相：

　　1、 流動相應(yīng)選用色譜純試劑、***純水或雙蒸水，酸堿液及緩沖液需經(jīng)過濾后使用，過濾時注意區(qū)分水系膜和油系膜的使用范圍;

　　2、 水相流動相需經(jīng)常更換(一般不超過2天)，防止長菌變質(zhì);

　　3、 使用雙泵時，A、B、C、D四相中，若所用流動相中有含鹽流動相，則A、D(進(jìn)液口位于混合器下方)放置含鹽流動相，B、C(進(jìn)液口位于混合器上方)放置不含鹽流動相;

　　A、B、C、D四個儲液器中其中一個為棕色瓶，用于存放水相流動相。

　　樣品：

　　1、 采用過濾或離心方法處理樣品，確保樣品中不含固體顆粒;

　　2、 用流動相或比流動相弱(若為反相柱，則極性比流動相大;若為正相柱，則極性比流動相小)的溶劑制備樣品溶液，盡量用流動相制備樣品液;手動進(jìn)樣時，進(jìn)樣量盡量小，使用定量管定量時，進(jìn)樣體積應(yīng)為定量管的3～5倍;

　　色譜柱：

　　1、 使用前仔細(xì)閱讀色譜柱附帶的說明書，注意適用范圍，如pH值范圍、流動相類型等;

　　2、 使用符合要求的流動相;

　　3、 使用保護(hù)柱;

　　4、 如所用流動相為含鹽流動相，反相色譜柱使用后，先用水或低濃度甲醇水(如5%甲醇水溶液)，再用甲醇沖洗。

　　5、 色譜柱在不使用時，應(yīng)用甲醇沖洗，取下后緊密封閉兩端保存;

　　6、 不要***壓沖洗柱子;

　　7、 不要在***溫下長時間使用硅膠鍵合相色譜柱;

　　使用過程中注意輕拿輕放。

　　操作過程：

　　1、 開機(jī)操作：(1)、打開電源，用Harb相連接時，注意Harb電源，打開計算機(jī)，打開Bootp Server(一般啟動時已打開);

　　(2)、自上而下打開個組件電源，Bootp Server里顯示有信號時(有六行字符)，打開工作站(先打開On line);

　　(3)、打開沖洗泵頭的10%異丙醇溶液的開關(guān)(需用針捅抽)，控制流量大小，以能流出的***小流量為準(zhǔn);

　　(4)、注意各流動相所剩溶液的容積設(shè)定，若設(shè)定的容積低于***低限會自動停泵，注意洗泵溶液的體積，及時加液;

　　(5)、使用過程中要經(jīng)常觀察儀器工作狀態(tài)，及時正確處理各種突發(fā)事件。

　　2、 先以所用流動相沖洗系統(tǒng)一定時間(如所用流動相為含鹽流動相，必須先用水沖洗20分鐘以上再換上含鹽流動相)，正式進(jìn)樣分析前30min 左右開啟D燈或W燈，以延長燈的使用壽命;

　　3、 建立色譜操作方法，注意保存為自己命名的Method，勿覆蓋或刪除他人的方法及實驗結(jié)果;

　　4、 使用手動進(jìn)樣器進(jìn)樣時，在進(jìn)樣前和進(jìn)樣后都需用洗針液洗凈進(jìn)樣針筒，洗針液一般選擇與樣品液一致的溶劑，進(jìn)樣前必須用樣品液清洗進(jìn)樣針筒3遍以上，并排除針筒中的氣泡;

　　5、 溶劑瓶中的沙芯過濾頭容易破碎，在更換流動相時注意保護(hù)，當(dāng)發(fā)現(xiàn)過濾頭變臟或長菌時，不可用超聲洗滌，可用5%稀硝酸溶液浸泡后再洗滌;

　　6、 實驗結(jié)束后，一般先用水或低濃度甲醇水溶液沖洗整個管路30分鐘以上，再用甲醇沖洗。沖洗過程中關(guān)閉D燈、W燈;

　　7、 關(guān)機(jī)時，先關(guān)閉泵、檢測器等，再關(guān)閉工作站，然后關(guān)機(jī)，***后自下而上關(guān)閉色譜儀各組件，關(guān)閉洗泵溶液的開關(guān);

　　8、 使用者須認(rèn)真履行儀器使用登記制度，出現(xiàn)問題及時向老師報告，不要擅自拆卸儀器。

　　(續(xù))

　　1、 操作過程若發(fā)現(xiàn)壓力很小，則可能管件連接有漏，注意檢查。當(dāng)出現(xiàn)錯誤警告(各組件指示燈均為紅色)，一般為漏液，其中一個感應(yīng)器中已有溶劑，漏液故障排除后，擦干，點擊On line操作界面中的Instrument/System Off，然后再點擊操作界面中的Instrument/System On即可。

　　2、 連接柱子與管線時，應(yīng)注意擰緊螺絲的力度，過度用力可導(dǎo)致連接螺絲斷裂。柱接頭處易發(fā)生漏液，可能情況為接頭Fittings中間的管子未和接口處貼緊。不同廠***的管線及色譜柱頭結(jié)構(gòu)有差異，***好不要混用，必要時可使用PEEK管及活動接頭;

　　3、 操作過程若發(fā)現(xiàn)壓力非常***，則可能管路已堵，應(yīng)先卸下色譜柱，然后用分段排除法檢查，確定何處堵塞后解決。若是保護(hù)柱或色譜柱堵塞，可用小流量流動相或以小流量異丙醇沖洗，還可采用小流量反沖的辦法(新柱不提倡)，若還是無法通暢，則需換柱;

　　4、 運(yùn)行過程中自動停泵，可能為壓力超過上限或流動相用完;

　　5、 樣品瓶中樣品較少，自動進(jìn)樣器進(jìn)樣針無法到達(dá)液面，可采用調(diào)低進(jìn)樣針進(jìn)樣***度的辦法，注意設(shè)置時不要使進(jìn)樣針碰到瓶底，微量樣品分析應(yīng)使用微量樣品瓶;

　　6、 自動進(jìn)樣器進(jìn)樣針未與樣品瓶瓶口對準(zhǔn)時，需重新定位。

　　7、 泵壓不穩(wěn)或流量不準(zhǔn)，可能為柱塞桿密封圈問題或seal wash墊圈問題，需更換;

　　8、 基線產(chǎn)生不規(guī)則噪聲，可能原因為系統(tǒng)不穩(wěn)定或沒達(dá)到化學(xué)平衡(使其平衡，若用離子對試劑，在***次使用使需要足夠的時間和溶劑體積，色譜柱才能達(dá)到足夠的平衡)，流動相被污染(更換流動相，清洗儲液器、過濾器，沖洗并重新平衡系統(tǒng))，色譜柱被污染(為證明可能的原因更換系統(tǒng)的色譜柱或使用一根同類的被證明性能好的色譜柱)，檢測器不穩(wěn)定;

　　9、 短期有規(guī)則的噪聲，可能原因為泵壓不穩(wěn)或泵脈沖，調(diào)節(jié)溶劑不適當(dāng)(如兩種溶劑的互溶性問題)，泵入口管路松或堵塞，泵太臟，泵柱塞磨損，檢測器不穩(wěn)定;

　　10、 長期有規(guī)則噪聲，可能原因為室溫不穩(wěn)(未使用柱溫箱)或使用柱溫箱不當(dāng);

　　11、 基線漂移，可能原因為系統(tǒng)不穩(wěn)或沒有達(dá)到化學(xué)平衡，室溫不穩(wěn)(未使用柱溫箱)，流動相污染或分解，柱污染，檢測池泄漏，系統(tǒng)泄漏，固定相流失(另選流動相，另選色譜柱)，測定的波長選擇錯誤(對溶劑有吸收)，樣品組分保留太長(用強(qiáng)度合適的溶劑清洗色譜柱)，檢測器不穩(wěn)定;

　　12、 每次進(jìn)樣時的保留時間不重復(fù)，可能原因為系統(tǒng)不穩(wěn)或未達(dá)到化學(xué)平衡，由于氣泡、各部件磨損等原因引起的泵壓或泵脈沖輸液不穩(wěn)定，進(jìn)樣體積太大或樣品濃度太***平衡被破壞，溶劑配比不合適，柱被污染;

　　13、 無峰，可能原因為檢測器選擇錯誤，使用錯誤的流動相，樣品降解;

　　14、 色譜峰比預(yù)計的小，可能原因為進(jìn)樣體積錯誤，檢測器燈故障，進(jìn)樣問題(瓶號錯、進(jìn)樣體積不合適、進(jìn)樣錯誤、針頭堵塞);

　　15、 峰變寬，可能原因為進(jìn)樣體積太大或樣品濃度太***，過濾器、保護(hù)柱入口、柱入口或連接管路有部分堵塞，檢測器時間常數(shù)設(shè)置錯誤，進(jìn)樣器問題(如閥漏、針頭堵塞或損壞)，柱或保護(hù)柱被污染，對流動相來說樣品溶劑太強(qiáng)，使用錯誤的色譜柱，溫度變化;

　　16、 出現(xiàn)雙峰/肩峰，可能原因為保護(hù)柱或柱入口部分阻塞，柱或保護(hù)柱被污染，柱性能下降，保護(hù)柱失效，進(jìn)樣體積太大或樣品濃度太***(樣品過載)，平衡破壞;

　　17、 前沿峰，可能原因為進(jìn)樣體積太大或樣品濃度太***(樣品過載)，平衡破壞，對于流動相來說樣品溶劑非極性太強(qiáng)(對于反相柱)，柱或保護(hù)柱被污染，柱性能下降，保護(hù)柱失效;

　　18、 脫尾峰，可能原因為柱或保護(hù)柱被污染，柱性能下降，保護(hù)柱失效，進(jìn)樣器問題(如閥漏等)，檢測器時間常數(shù)設(shè)置錯誤;

　　19、 出現(xiàn)鬼峰，可能原因為流動相被污染，樣品預(yù)處理時產(chǎn)生降解或混入雜質(zhì)，先前進(jìn)樣的流出物，樣品定量管清洗不當(dāng)，注射器臟，柱被污染，進(jìn)樣裝置被污染，流動相中含有穩(wěn)定劑/穩(wěn)定劑變化。